Pse spektrofotometri duhet të vendoset në një gjatësi vale të caktuar?

2024 Autor: Miles Stephen | [email protected]. E modifikuara e fundit: 2023-12-15 23:40

Kur rregulloni gjatësia valore ne nje spektrofotometër , ti janë ndryshimi i pozicionit të prizmit ose grilës së difraksionit në mënyrë që të ndryshme gjatësi vale të dritës janë drejtuar në të çarë. Sa më e vogël të jetë gjerësia e çarjes, aq më e mirë është aftësia e instrumentit për të zgjidhur përbërës të ndryshëm.

Nga kjo, në çfarë gjatësi vale do të vendoset spektrofotometri?

Në varësi të diapazonit të gjatësisë së valës së burimit të dritës, ai mund të klasifikohet në dy lloje të ndryshme: spektrofotometër i dukshëm me rreze UV: përdor dritën mbi rrezen ultravjollcë (185 - 400 nm) dhe rrezen e dukshme (400 - 700 nm ) të spektrit të rrezatimit elektromagnetik.

Po kështu, pse duhet të kalibroni spektrometrin sa herë që ndryshoni gjatësinë e valës? Spektrofotometri duhet të jetë të kalibruar kundër një zgjidhje boshe kështu se matjet pas tij mund të përdorin thithjen e solucionit bosh si referencë zero. Një masë e aftësisë së një lënde për të thithur dritën e një të caktuar gjatësia valore.

në çfarë gjatësi vale duhen marrë leximet?

Merrni lexime në intervale 5 nm pak para dhe pas kësaj gjatësia valore . Për shembull, nëse absorbimi maksimal u gjet në 450 nm, atëherë për të marrë një më të saktë duke lexuar e λmax, marrin absorbimin lexime në 440, 445, 455 dhe 460 nm.

Pse po e matni absorbimin e tretësirës në 550 nm?

Proteinat reagojnë me jonet e bakrit në alkaline zgjidhje për të formuar një kompleks me ngjyrë vjollce që thith dritën në 550 nm . Prandaj, nga duke matur përqendrimi i kompleksit, duke përdorur A550 ( Absorbimi në 550 nm ), ju janë gjithashtu duke matur përqendrimi i proteinave.