Sa kushton për të transformuar një ligation?
Sa kushton për të transformuar një ligation?

Video: Sa kushton për të transformuar një ligation?

Video: Sa kushton për të transformuar një ligation?
Video: What Happened To Texan Embassies? 2024, Nëntor
Anonim

Transformimi . Shtoni midis 1-5 µl lidhja përzierje në qelizat kompetente për transformimi . Zgjeruar lidhja me PEG shkakton një rënie në transformimi efikasitet (i shpejtë Lidhja Kit). Elektroporimi rekomandohet për konstruksione të mëdha (>10,000 bp).

Prandaj, sa produkt lidhës më nevojitet për transformim?

Transformimi . Shtoni midis 1-5 µl lidhja përzierje në qelizat kompetente për transformimi . Zgjeruar lidhja me PEG shkakton një rënie në transformimi efikasitet (i shpejtë Lidhja Kit). Elektroporimi rekomandohet për konstruksione të mëdha (>10,000 bp).

Më pas, pyetja është, çfarë është Lidhja dhe transformimi? Në një eksperiment tipik klonimi, studiuesit fillimisht futin një pjesë të ADN-së, siç është një gjen, në një pjesë rrethore të ADN-së të quajtur plazmid. Ky hap përdor enzimat kufizuese dhe ligazën e ADN-së dhe quhet a lidhja . Pas një lidhja , hapi tjetër është transferimi i ADN-së në baktere në një proces të quajtur transformimi.

Më pas, dikush mund të pyesë gjithashtu, sa ADN nevojitet për një lidhje?

Përqendrimi i përgjithshëm i vektorit + insert duhet të jetë ndërmjet 1-10 Μg/ml për efikasitet lidhja . Vektori: Insert raportet molare midis 1:1 dhe 1:10 rekomandohen (1:3 është tipike). Nëse nuk jeni të sigurt për të ADN përqendrimet, kryejnë lidhje të shumta me raporte të ndryshme.

Sa kohë mund të ruani një reaksion ligation?

Lidhjet mund të bëhet në temperaturë dhome ose më të freskët (mendoni 12-16°C) gjatë natës ose edhe për disa ditë, nëse ti janë vërtet të zënë. Ti mundesh gjithashtu ruaj një ligation në frigorifer dhe nxirreni më vonë për të vazhduar lidhjen në temperaturën e dhomës për aq gjatë sipas nevojës.

Recommended: