Cili është qëllimi i pastrimit të produktit PCR?
Cili është qëllimi i pastrimit të produktit PCR?

Video: Cili është qëllimi i pastrimit të produktit PCR?

Video: Cili është qëllimi i pastrimit të produktit PCR?
Video: Веб-программирование — информатика для бизнес-лидеров 2016 2024, Nëntor
Anonim

Pastrimi e ADN-së nga a PCR reaksioni është zakonisht i nevojshëm për përdorim në rrjedhën e poshtme dhe lehtëson heqjen e enzimave, nukleotideve, primerëve dhe përbërësve bufer. Tradicionalisht kjo u realizua duke përdorur metoda të nxjerrjes organike, të tilla si nxjerrja e kloroformit të fenolit, e ndjekur nga precipitimi me etanol.

Gjithashtu pyetja është, pse është i nevojshëm pastrimi i produkteve PCR?

Ju duhet të pastroni produktet PCR për të hequr qafe primerët, nukleotidet dhe enzimat e papërdorura në mënyrë që të optimizohet suksesi i lidhjes, i cili do të ruajë dhe renditë produkt e PCR . te pastroj të Produktet PCR , përdoret kromatografia me përjashtim të madhësisë.

Për më tepër, çfarë duhet të bëj pas PCR? Për të maksimizuar rikuperimin, shpëlajeni kupën e mbajtjes dy herë me 10 deri në 20 µL TE ose ujë. Fundi PCR reaksioni mund të përmbajë deri në një mikrogram të ADN-së së përforcuar që mund të përdoret për një sërë aplikimesh të biologjisë molekulare. Këto aplikacione mund të jenë pak a shumë të ndjeshme ndaj komponentëve të mbetur të PCR përzierje reagimi.

Dikush mund të pyesë gjithashtu, si i pastroni produktet PCR?

Metodat klasike të përdorura për pastër lart Produktet PCR para sekuencës përfshijnë elektroforezën me xhel, precipitimin e etanolit dhe kromatografinë e kolonës. Megjithëse janë mjaft efektive, këto metoda mund të bëhen shpejt të vështira kur përpunohen mostra të shumta paralelisht dhe shfaqin shkallë të ndryshme të humbjes së mostrës.

Pse duhet pastruar ADN-ja?

ne pastër lart ADN nga solucionet ujore për të hequr kripërat buferike, enzimat ose substancat e tjera që mund të ndikojnë në aplikimet në rrjedhën e poshtme. Shembujt përfshijnë reagimin PCR pastër lart, pastër deri pas kufizimit tretet dhe pastër deri në gjenomike ose plazmide ADN të kontaminuara me proteina/mbeturina qelizore.

Recommended: